Суспензии живых

Исследовалась возможность изучения репликации ВТМ в полосках эпидермиса, отделенных от листа непосредственно после инокуляции и плавающих на поверхности питательного раствора или дистиллированной воды. В таких полосках эпидермиса через 21—45 ч после инокуляции наблюдалось повышение инфекционности; через 50 ч, однако, инфекционность снова снижалась. Удавалось также инокулировать вирусом табачной мозаики нижнюю поверхность полосок эпидермиса, снятых со стебля томатов. Обычно во влажных условиях полоски эпидермиса сохраняют жизнеспособность в течение нескольких дней.

В принципе суспензии живых, но не делящихся клеток обеспечивают экспериментатору ряд преимуществ при изучении репликации вирусов; однако на практике действительно эффективной системы такого рода до сих пор предложено не было. Можно использовать также разобщенные клетки из ткани каллюса, растущие в культуре, или клетки листьев, разделенные ферментативной обработкой. Включение радиоактивных предшественников в ВТМ исследовалось на группах клеток из листьев. С этой целью инфицированные листья измельчали при контролируемых условиях так, чтобы от 30 до 50% клеток оставались интактными. В этих синтезировался меченый вирус. Изменения, вызываемые в клетках гомогенизацией, вероятно, довольно серьезны, однако они не были изучены.

Высокий выход интактных клеток (50—90%) из мезофилла листьев табака удавалось получить, снимая с листьев вручную нижний эпидермис, а затем ткань с помощью препарата грибной. При соответствующих условиях интактные клетки из листьев, инфицированных ВТМ, способны поддерживать репродукцию ВТМ в точение по крайней мере 24 ч. Если такие изолированные клетки инкубировать с препаратом грибной, то они превращаются в сферические протопласты. Это может открыть новые возможности для изучения репликации вирусов, если только мы научимся эффективно осуществлять заражение таких протопластов.

Растительные клетки можно выращивать в культуре несколькими способами: выращивают либо целые органы (например, корни или верхушки стеблей), либо ткань каллюса, либо, наконец, клеточные суспензии. Все эти способы были испробованы при изучении репликации вирусов, однако результаты оказались неутешительными (если не считать некоторых микроскопических исследований). Количество вируса, продуцируемого в культуре ткани, обычно намного ниже, чем в интактных зеленых листьях.