Два вида помех
Перемещаясь из инокулированного
листа, вирус может проникать вначале в самые молодые листья, а затем
последовательно во все более и более старые. Таким: образом, при
системной инфекции стадии инфекционного процесса в разных листьях
могут быть совершенно различными. Время распространения
инфицирующего материала от инокулированных листьев к молодым может у
разных растений очень сильно варьировать. Вполне вероятно, однако,
что в молодых, системно инфицируемых листьях (у табака или китайской
капусты они будут иметь в длину около 4 см) большая часть клеток
заражается в течение 1—2 дней. Такие листья могут с максимальным
доступным нам приближением представлять ткань, в которой большая
часть клеток начинает продуцировать вирус приблизительно в одно и то
же время.
Представители этого семейства —
небольшие водные растения — во многих отношениях удобны для
биохимических и физиологических исследований. Их можно выращивать в
культуре при контролируемых условиях на средах известного состава.
Показано, что инфицируется вирусом табачной мозаики и Z-вирусом
картофеля. Возможно, эти растения удастся в будущем использовать в
качестве системы, пригодной для изучения определенных аспектов
репликации вирусов.
Метод отделенных листьев удобен в тех
случаях, когда для экспериментов требуется большое количество
листовой ткани. Черешки листьев можно поместить в воду или в
питательный раствор. Правда, в этих условиях листья обычно довольно
сильно различаются по количеству поглощаемой ими жидкости. Кроме
того, они могут неожиданно оказаться увядшими. С другой стороны,
этот метод сводит к минимуму такую проблему, как рост
микроорганизмов в ткани во время инкубации. Чаще листья помещают во
влажную камеру, закрытую стеклом. Инокулированные и
неинокулированные половинки листьев можно инкубировать раздельно.
При этом приходится считаться с возможностью роста бактерий, грибов
и простейших. Было, например, показано, что стерильные и
нестерильные листья редиса различаются по интенсивиости включения.
Довольно часто используют диски
ткани диаметром 5—20 мм, вырезаемые из листьев с помощью сверла для
пробок; эти диски плавают на поверхности дистиллированной воды или
питательного раствора. Преимущество данного метода состоит в том,
что он позволяет объединять в один образец кусочки из разных листьев
и тем самым сглаживать различия, существующие между отдельными
листьями. Два вида помех возникают, если с одними
ж
теми же дисками работают слишком долго (более нескольких дней).
Во-первых, на поверхности дисков и в межклетных пространствах
развиваются микроорганизмы. (Добавление антибиотиков не всегда
обеспечивает полное угнетение роста микроорганизмов; кроме того, они
могут совершенно изменить биохимические процессы в клетках.)
Во-вторых, у многих листовых дисков через довольно короткий срок
начинают по краям (на срезах жилок) закладываться корни.
Одновременно зеленая ткань все больше и больше стареет. Таким
образом, биохимическое состояние листовых дисков непрерывно
меняется.
|