Детали механизма
Эти данные позволяют предположить,
что цепь вирусной РНК в дуплексе реплицируется чаще, чем минус-цепь,
и что вновь образованные плюс-цепи вытесняются из дуплекса. Другими
словами, эти РНК вирусов растений реплицируются по асимметричному
полуконсервативному механизму (предположение о существовании такого
механизма высказывалось в отношении РНК-содержащих вирусов животных
и бактерий). Детали механизма синтеза комплементарной цепи и
образования копий вирусных РНК но установлены. Оценивая приведенные
выше рассуждения и результаты, необходимо учитывать, что
двухцепочечная структура, возможно, возникает в процессе экстракции
РНК благодаря спариванию оснований между минус-цепью
ж прикрепленной к ней частично
синтезированной плюс-цепью.
Некоторые авторы, использовавшие в
своих опытах бесклеточные экстракты или фракции из инфицированных
листьев, утверждали, что материал, синтезированный, обнаруживал
отдельные свойства, типичные для вирусной РНК. Однако ни в одном из
этих случаев не было представлено несомненных доказательств синтеза
новой инфекционной вирусной РНК, как. это было сделано в опытах с
бактериофагом. Для синтеза РНК в бесклеточной системе использовались
препараты, выделенные из листьев китайской капусты и состоящие
главным образом из хлоропластов и ядер с добавлением четырех систем.
Такие препараты, выделенные как из здоровых, так и из инфицированных
ВЖМТ листьев, синтезировали одноцепочечную РНК, причем этот синтез
мог быть подавлен актиномицином D. Препараты из листьев,
инфицированных ВЖМТ, синтезировали также двух-цепочечную РНК; синтез
двухцепочечной РНК был устойчив к действию актиномицина D. Однако
четких доказательств синтеза интактной РНК ВЖМТ в этой системе
представлено не было. Сходные результаты были получены для
экстрактов из листьев ячменя, инфицированных вирусом мозаики костра.
Утверждения, что в бесклеточной системе была синтезирована
инфекционная вирусная РНК, вызывают сомнения.
Сообщалось о выделении и частичной
очистке РНК-синтетазы из листьев китайской капусты, инфицированных
ВЖМТ. В соответствующей среде, содержащей четыре, синтезировались.
Они были идентифицированы как смесь одно и двухцепочечной РНК ВЖМТ в
опытах по гибридизации меченого радиоактивного продукта
ферментативной реакции и немеченой двухцепочечной РНК. Размер
синтезированных полинуклеотидов не определялся. Позже выяснилось,
что в таком препарате за время инкубации (30 мин) синтезировалось
больше одноцепочечной РНК. Была предпринята также попытка выделить
РНК-синтетазу, специфичную для ВЖМТ, путем фракционирования белков
из экстрактов листьев, инфицированных ВЖМТ, на колонке; однако
уровень активности фермента оказался при этом очень низким.
Повышение РНК-полимеразной активности было отмечено в листьях
огурца, инфицированных вирусом огуречной мозаики. Потребуется,
несомненно, еще много усилий для выделения и характеристики этих
ферментов из инфицированных растительных тканей. |
