Восстанавливающие агенты
При использовании механических способов передачи с
целью выявления присутствия вируса как возбудителя данного
заболевания необходимо иметь в виду основные причины, которые могут
привести к появлению отрицательных результатов. Эти причины таковы:
1) присутствие ингибиторов в отжатом соке растений; 2) низкая
концентрация вируса или слабо выраженная чувствительность
растения-хозяина; 3) нестабильность вируса в экстрактах из листьев.
При инокуляции необходимо исследовать влияние
различных добавок к инокулуму, таких, как фосфат или
восстанавливающие агенты (например, сульфит или цистеин), а также
бентонит. Инокулум должен быть использован немедленно, причем для
инокуляции необходимо отобрать молодые растения, выращенные при
средней или низкой освещенности. В качестве абразива рекомендуется
использовать карборунд. Немедленно после инокуляции листья должны:
быть промыты водой. Помимо тех видов растений, которые служат
источником инокулума, в качестве растений-хозяев следует исследовать
и ряд других видов. К их числу относятся такие растения, как огурец,
коровий горох и, которые,
как известно,
высокочувствительны ко многим вирусам и являются хорошими
индикаторными растениями. В развитии наших знаний о вирусах,
инфицирующих древесные породы, большую роль сыграло использование в
качестве первичных индикаторных растений травянистых видов. По ряду
причин древесные виды сами по себе обычно неудобно использовать в
качестве опытных растений-хозяев при проведении механической
инокуляции. В качестве контроля па присутствие ингибиторов в отжатом
соке рекомендуется смешать его с ВТМ и инокулировать этой смесью
растения. В том случае, если экстракт из листьев содержит
ингибиторы, следует исследовать другие части растения, например
чашелистики, лепестки или корпи. Проблему ингибиторов можно решить
иначе, применив простой способ инокуляции, при котором кусочки ткани
больных листьев растирают непосредственно на листьях индикаторных
растений.
В ряде случаев, когда все другие методы
оказываются неэффективными, успешную инокуляцию можно осуществить,
измельчая ткани листа в присутствии фенола и используя в качестве
инокулума водную фазу после удаления фенола. Эффективность этого
метода, возможно, связана с удалением каких-то ингибиторов вируса,
которые переходят в фенольную фазу или в материал, накапливающийся
на поверхности раздела фаз; успех может быть обусловлен также тем,
что этот вирус нестабилен или существует в виде неполных частиц и
легко разрушается нуклеазами листа в отсутствие фенола. Кроме того,
в ряде случаев обработка фенолом, возможно, приводит к освобождению
вируса из комплексов с некоторыми клеточными структурами, в которых
вирус в неактивной форме находится в обычных клеточных экстрактах.
Следует помнить, что инфекционность этих экстрактов остается
полностью чувствительной к нуклеазами, присутствующими ни стеклянной
посуде, руках и инструментах, используемых при инокуляции. Этот
метод, однако, не всегда успешен, не удалось передать с помощью
больных тканей картофеля вирус скручивания листьев картофеля.
Если в эксперименте заболевание удается передать
переносчиками, которые принадлежат к группам, несомненно участвующим
в передаче вируса, само по себе обнаружение этого факта представляет
собой хорошее подтверждение предположения о вирусной природе данного
заболевания. |
