Действие ферментов

Действие ферментов. Одноцепочечная вирусная РНК крайне чувствительна к действию рибонуклеаз. Поскольку достаточно только одного разрыва в молекуле РНК, чтобы она потеряла инфекционность, крайне важно избежать действия фермента в процессе выделения РНК. В очищенных вирусных препаратах часто присутствуют следы рибонуклеаз из листьев. Они должны быть удалены либо из вирусного препарата, либо во время выделения РНК, либо, наконец, в ходе этого процесса следует использовать ингибиторы рибонуклеаз. Деградация под действием нуклеаз может быть также сведена к минимуму, если использовать условия, при которых активность фермента минимальна — низкая температура (0—4 °С), соответствующие значения рН и ионной силы.

Повторные процедуры. Полностью удалить незначительные примеси нуклеаз весьма трудно. Поэтому при выделении нужно избегать методов, к числу которых относятся продолжительный диализ или повторное переосаждение из водных растворов.

Гидродинамические воздействия. Опасность разрушения под влиянием подобных воздействий не является проблемой для одноцепочечных РНК мелких вирусов. Однако в случае больших двухцепочечных РНК (вирус раневых опухолей и вирус карликовости риса), а также при работе с двухцепочечными формами одноцепочечных вирусных РНК, обладающими выраженной ДНК-подобной структурой, следует избегать различных жестких воздействий при выделении.