Выделение РНК
Выделение РНК из очищенных или частично очищенных
препаратов вируса включает освобождение РНК от защитной белковой
оболочки и последующее отделение этой нуклеиновой кислоты от белка и
любых других вирусных компонентов, например липидов, а также от
любых примесей, имеющихся в препарате вируса. В большинстве ранних
работ, связанных с исследованием вирусной РНК, не учитывали
лабильность молекул РНК, так что обычно выделяли сильно
деградированные продукты. Однако, с тех пор,
как было показано, что именно РНК вируса обладает инфекционностью
, возникла задача получать недеградированные, обладающие
инфекционностью препараты или выделять
свободную РНК в состоянии, максимально близком к тому, в котором:
она находится в вирусной частице.
В настоящее время совершенно очевидно, что,
применяя различные физические и химические агенты, можно удалить
вирусный белок и выделить инфекционную РНК при условии, что 1) еще в
вирусной частице РНК была инфекционной, 2) во время выделения не
применялись бы крайние значения рН среды и 3) РНК была бы защищена
от действия нуклеаз. Методы, которые используются для удаления
вирусного белка, иллюстрируют стабильность вирусов в отношении
различных химических и физических обработок. Другие аспекты этой
проблемы обсуждаются в гл. XIV.
Концентрация водородных ионов. При выделении не
следует применять крайние значения рН. Известно, что при рН выше 10
начинают гидролизоваться фосфодиэфирные связи, а при рН несколько
ниже 3 медленно высвобождаются пуриновые основания, тогда как при
еще более низких значениях рН наступает интенсивная и быстрая
деградация молекул РНК. |