Электронная микроскопия

Электронная микроскопия и рентгеноструктурный. анализ являются основными методами, используемыми для исследования строения вирусных частиц. Ранние электронные микрофотографии подтвердили данные о палочкообразной форме ВТМ и позволили определить его приблизительные размеры, но они были не очень четкими из-за недостаточного контраста между вирусными частицами и пленкой-подложкой. Появление метода оттенения тяжелыми металлами значительно увеличило ценность электронной микроскопии для определения общего размера и формы вирусных частиц. Однако покрытие металлом в большей или меньшей степени затрудняло выявление структурных деталей. С появлением в 1950-х годах микроскопов с высоким разрешением и метода негативного контрастирования электронная микроскопия стала важным средством изучения субструктуры вирусов.

На основании сравнительного изучения физико-химических свойств вирусного нуклеопротеида и пустой вирусной белковой оболочки, обнаруженной в препаратах вируса желтой мозаики турнепса (ВЖМТ), Маркхэм пришел к выводу, что РНК вируса должна находиться внутри белковой оболочки. Эта точка зрения сейчас уже широко подтверждена в отношении этого и других вирусов данными рентгеноструктурного анализа. Крик и Уотсон предположили, что белковые оболочки мелких вирусов построены из большого числа идентичных субъединиц, образующих либо палочкообразные частицы со спиральной симметрией, либо сферические структуры с кубической симметрией. Последующие рентгенографические и химические исследования подтвердили эту точку зрения. Каспар и Клуг сформулировали общую теорию, ограничивающую возможное число и расположение белковых субъединиц, образующих оболочки мелких изометрических вирусов. Наши современные знания о крупных вирусах с более сложной симметрией и структурой основаны на данных электронной микроскопии с использованием методов негативного контрастирования и ультратонких срезов.