Высвобождения вируса
При этом осаждается клеточный детрит и
коагулируемый материал клеток хозяина. В результате
центрифугирования экстракт, обработанный н-бутанол — хлороформом,
разделяется на две фазы, причем вирус остается в водной фазе, а
основная часть денатурированного материала находится в интерфазе.
Следует заметить, что, хотя некоторые вирусы устойчивы к обработке
м-бутанол — хлороформом, у других она может вызвать довольно
серьезные потери. Обработка одним лишь хлороформом является более
мягким приемом, чем обработка смесью бутанол — хлороформ. Для
некоторых вирусов эмульгирование экстракта из листьев дает хорошее
первоначальное осветление без серьезной потери.
Иногда вместо центрифугирования для первичного
удаления загрязняющего экстракт материала клеток растения-хозяина
применяют фильтрование через фильтры из бумаги и тому подобных
материалов. Для многих вирусов, вероятно, очень важно проводить их
выделение как можно быстрее после получения экстракта из листьев.
Однако описали систему из листьев табака, инактивирующую вирус.
Когда вирус осаждали из свежеотжатого сока, то инактивирующая
система осаждалась вместе с вирусом. В осадке инактивирующая система
была стабильна и инактивировала вирус некроза табака и вирус
кольцевой пятнистости табака. В экстракте из листьев, хранившихся
при 18 °С в течение дня, инактивирующая система разрушалась, в связи
с чем из таких экстрактов путем осаждения можно было получить
гораздо более стабильные препараты вируса.
В клетке некоторые вирусы существуют в виде
окруженных мембранами агрегатов. Поэтому требуется время для
высвобождения вируса после получения экстракта из листьев. Если
проводить центрифугирование вскоре после экстрагирования, то даже
при низкой скорости большая часть вируса будет потеряна с первым же
осадком. |