Примесь клеточных веществ
Примесь клеточных веществ, которые способны
диффундировать и обладают антигенными свойствами, можно выявить с
помощью очень чувствительных серологических методов, таких, как
иммуиодиффузия и иммуноэлектрофорез.
Для вирусов с хорошо установленным элементарным
химическим составом (например, ВТМ) такие методы, как определение
отношения фосфора к азоту, позволяют обнаружить примеси, содержащие
азот иди фосфор, если они присутствуют в значительном количестве.
При определенных обстоятельствах могут быть применены также более
сложные химические методы, например анализ концевых групп белков,
позволяющий обнаружить всего-навсего одну аминокислоту. Можно также
использовать метод «отпечатков пальцев» для разделения пептидов
триптического гидролизата хорошо охарактеризованных вирусных белков,
но чувствительность его как критерия чистоты также невысока.
В качестве теста да чистоту можно использовать
различные радиохимические методы. Например, для определения
фосфорсодержащих примесей, иных, нежили РНК, в растение, в котором
размножается вирус, в качестве метки вводят ортофосфат. Затем вирус
выделяют и РНК гидролизуют щелочью либо прямо в вирусе, либо после
выделения ее из вируса. Гидролизат разделяют хроматографией или
электрофорезом. Только в четырех рибонуклеотидах РНК. Другой метод
использования радиоактивных изотопов для контроля эффективности
очистки состоит в следующем. В здоровое растение в течение
нескольких дней вводят ортофосфат или сульфат. Материал, содержащий
метку, затем смешивают (прежде чем получить экстракт из листьев) с
равным количеством немеченой инфицированной вирусом ткани. При
активности мотки порядка нескольких чувствительность этого метода
поразительна. Но при всем том полученные результаты не могут служить
окончательным критерием отсутствия компонентов. В частности, не
исключено, что при инфицировании вирусом в клетке образуются
вещества, которых нет в здоровой ткани. В настоящее время имеется
лишь одно общее правило при решении вопроса о чистоте препарата
вируса — он должен отвечать требованиям эксперимента. |
