При сравнении полос

В слое агара пробивают лунки, располагая их в определенном порядке. В обычных опытах по двойной диффузии антисыворотку вносят в центральную лунку, а растворы антигена — в несколько лунок, располагая их вокруг центральной. Растворы антигена и антител диффундируют в агаре навстречу друг другу, и через какое-то время в зоне, где оба реагента оказываются в подходящих соотношениях, образуется комплекс. В этой точке реагенты выпадают из раствора и появляются видимые полосы преципитации. Нереагирующий антиген (или антитела) может проходить сквозь полосу преципитации, не задерживаясь. Полосы преципитации можно наблюдать визуально при подходящем освещении, их можно сфотографировать, а можно и воспользоваться белковыми красителями. Если в препарат вируса ввести радиоактивную метку, то для выявления полое преципитации можно воспользоваться радиоавтографией; в соответствующих условиях метод радиоавтографии отличается высокой чувствительностью.

Особенно важное значение в опытах по иммунодиффузии имеют концентрации и соотношения реагентов. Наилучшие результаты получаются в том случае, когда антиген и антитела используются в соотношениях, близких к оптимальным. Отклонение от оптимальных соотношений ведет к тому, что полоса преципитации перемещается и располагается ближе к одной из лупок. При достаточно выраженном нарушении соотношений один антиген может дать несколько полос преципитации.

При сравнении полос преципитации, образуемых двумя антигенами, находящимися в соседних лунках, различают несколько типов расположения этих полос.

Материал, содержащийся в полосах преципитации на пластинках агара, можно исследовать с помощью электронного микроскопа, применив метод негативного контрастирования.

При отсутствии тщательного контроля возможны артефакты и нередко возникают трудности при интерпретации результатов. Работая с вирусами растений, следует иметь в виду некоторые дополнительные факторы. Диффузия вирусного антигена в геле в значительной мере зависит от размера и формы вирусной частицы. Для мелких сферических вирусов растений эти методы вполне пригодны; палочкообразные частицы могут диффундировать медленно или не диффундировать вовсе. Интактный ВТМ хотя и медленно, но диффундирует в агаре; для некоторых же других палочкообразных вирусов этот метод оказывается непригодным. При работе с вирусами, имеющими форму длинной палочки, в качестве антигена можно использовать продукты деградации вируса. Интактный вирус мозаики турнепса не дает в геле реакции преципитации, однако после обработки ультразвуком, приводящей к разрушению вирусных частиц, антиген образует в агаре четкую полосу преципитации. Скорость диффузии в агаровом геле используется для определения размера антигенов изучаемых вирусов. Поведение ВТМ в агаровом геле в значительной мере зависит от концентрации солей; использование концентрированных растворов усиливает агрегацию. Применение соответствующего детергента нередко обеспечивает быструю миграцию в геле продуктов деградации вируса.