Способность антител
Для изучения внутриклеточной локализации вирусов и
их распространения по тканям растения-хозяина и
насекомого-переносчика применяют метод флуоресцирующих антител.
Нагараи подробно описывает методику приготовления
и хранения флуоресцирующих антител it ВТМ; эта методика позволит
избежать неспецифического окрашивания, для учета которого ставится
ряд контролей: 1) инфекционный материал, обработанный гетерологичной
антисывороткой, с флуоресценном; 2) инфекционный материал,
предварительно обработанный специфической антисывороткой; 3)
здоровая ткань, обработанная вирусоспецифическими флуоресцирующими
антителами.
Способность антител проникать в клетки мезофилла
зависит от возраста листа. В клетки более старых листьев антитела
проникают легко; проникновение их в клетки молодых листьев
происходит лишь после фиксации последних в спирте, ацетоне или
жидкости Карнуа. Этот метод оказался малопригодным для изучения
внутриклеточной локализации вируса, но его можно с успехом применять
для изучения распространения вируса в тканях. Недавно данный метод
был использован в работе с протопластами клеток мезофилла,
зараженных ВТМ.
Многие авторы успешно использовали метод
флуоресцирующих антител для выявления вирусных антигенов в
насекомых-переносчиках.
Белок антител, специфически связанных с антигеном
внутри клетки, не отличается по проницаемости для электронов от
белков самой клетки, и потому с помощью электронного микроскопа его
выявить нельзя. Однако разработаны методы конъюгации антител с
ферритином — низкомолекулярным белком, содержащим большое количество
железа. Такие антитела можно использовать в качестве «красителя» при
электронной микроскопии. Шалла и Амици применяли этот метод при
изучении распределения белка ВТМ в клетках листьев томатов. Он дает
гораздо более высокое разрешение по сравнению с методом
флуоресцирующих антител и позволяет обнаруживать единичные вирусные
частицы.
Основная трудность при работе этим методом связана
с достижением эффективного проникновения антител в ткани растения,
однако в будущем он обещает стать самым плодотворным методом
изучения внутриклеточной локализации вирусных антигенов. |