Замораживание и оттаивание
В заключение следует отметить, что существует по
крайней мере пять возможных механизмов, с помощью которых нагревание
in vivo может привести к инактивации вируса, ограничению его
продукции и к появлению свободных от вируса растений (или частей
растений): 1) инактивация интактных вирусных частиц, присутствующих
в клетке, вследствие разрыва цепи РНК, причем каких-либо других
значительных изменений в вирусной частице при этом не происходит.
Таким путем инактивируются, вероятно, вирус некроза табака и ВЖМТ.
Этот процесс сам по себе не может привести к освобождению растения
от инфекции, даже если все интактные вирусные частицы
инактивируются. Если синтезирующий вирус механизм остается
неповрежденным (хотя и не функционирует), он может снова прийти в
действие, как только растение окажется в нормальных температурных
условиях; 2) разрушение вирусной частицы с последующей
ферментативной деградацией ее компонентов. Это, вероятно, случается
с очень нестабильными вирусами типа вируса мозаики люцерны; 3)
инактивация таких ферментов, как, например, вирусоспецифичная
РНК-полимераза, что приводит к прекращению синтеза вирусной РНК.
Это, возможно, происходит с чувствительными к температуре мутантами
ВТМ, имеющими нормальный структурный белок; 4) предотвращение
процесса сборки вирусной частицы вследствие того, что структурный
белок не может принять правильную трехмерную конфигурацию при
высокой температуре. Последнее происходит с некоторыми
чувствительными к температуре мутантами ВТМ; 5) высокие (или низкие)
температуры могут замедлить или прекратить вовсе передвижение вируса
по растению, несмотря на то что верхушечный рост продолжается. При
этом вновь образовавшиеся части растения часто оказываются
свободными от вируса.
Замораживание и оттаивание инфицированных листьев
или сока из больных растений оказывает лишь незначительное влияние
на некоторые вирусы и поэтому часто используется для осветления
экстрактов при выделении вируса. При этом большая часть клеточных
белков растения-хозяина и материала клеточных структур утрачивает
растворимость. Некоторые вирусы (такие, как вирус мозаики люцерны и
гравировки табака) теряют инфекционность при замораживании и
оттаивании, однако в основном этот эффект обусловлен, по-видимому,
адсорбцией вируса на поверхности коагулированного клеточного белка,
а не непосредственной их инактивацией. Вирус кустистой карликовости
томатов устойчив к замораживанию в листьях, но инактивируется при
замораживании очищенных препаратов. Оттаивание приводит к
образованию нерастворимых и не обладающих инфекционностью
преципитатов, утративших в основном серологическую активность. При
замораживании интактных листьев или отжатого из них сока
значительная часть верхнего компонента ВЖМТ превращается в материал,
седиментирующий как гетерогенный компонент и располагающийся при
этом между белковыми и нуклеопротеидными фракциями. Предварительное
замораживание и оттаивание вируса в растворе делает ВТМ более
чувствительным к щелочной деградации. Вирусы, инактивирующиеся при
медленном замораживании, могут не инактивироваться, если
замораживание проводить очень быстро (например, в жидком азоте). При
быстром замораживании до 75 °С с последующим оттаиванием удалось
получить инфекционные препараты РНК ВЖМТ. |