Серологические методы
Серологические методы имеют следующие основные
недостатки: 1) пользуясь ими, можно определить количество вирусного
белкового антигена, но не количество обладающего инфекционностью
вируса: в некоторых случаях этот факт, конечно, имеет преимущество;
2) постановкой теста па инфекционность обычно удается обнаружить и
измерить приблизительно количества вируса, требуемого для проведения
реакции преципитации в пробирке. Однако при некоторых модификациях
этот метод требует меньше материала, чем при измерении
инфекционности; 3) линейная агрегация палочкообразных вирусов может
заметно влиять на результаты некоторых методов количественного
определения, описанных ниже; 4) до сих пор (и это самое главное) эти
методы можно использовать лишь в отношении ограниченного числа
вирусов растений, хотя число это очень быстро увеличивается.
В вирусологии лучше всего использовать
антисыворотки, которые можно получить в большом количестве путем
иммунизации кроликов. При этом весьма желательно получать сыворотку
с высоким титром. Это позволяет использовать в работе сильно
разбавленную сыворотку, исключая, таким образом, неспецифическио
иншбиторные эффекты, наблюдаемые при низких разбавлениях, и создает
возможность постановки большего числа тестов с одним и тем же
количеством сыворотки. При наличии большого запаса исходной
сыворотки, приготовленной для использования в серийных
исследованиях, имеет смысл получить диаграмму преципитации. Такие
диаграммы позволяют быстро определить соответствующие разбавления и
количество реагентов, необходимое для различных целей.
В этом случае готовится серия двукратных
разведений образцов вируса. Равные объемы разбавленной антисыворотки
добавляют в каждую пробирку, содержимое встряхивают и инкубируют при
30—37С. Затем отмечают предельное разбавление каждой пробы, при
котором образуется видимый преципитат. Применительно к мелким
сферическим вирусам растений этот метод дает хорошо воспроизводимые
результаты. Однако при работе с палочкообразными вирусами чем более
агрегирован препарат, тем меньше вируса требуется для образования
видимого преципитата. |